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关节炎

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龟鹿二仙胶的性味及功用 对症治疗骨关节炎

中医中药秘方网 www.21nx.com 发布时间:2018-01-05
龟鹿二仙胶治疗骨关节炎的研究概况

骨关节炎在中医学中属于 “痹证” “痿证” 等范畴, 该病最 早记载于《黄帝内经》 。 《黄帝内经》认为本病的病机是肝肾亏 虚、 长期劳损及外感风寒湿邪所致。 《素问·痹证》记载: “风 寒湿三气杂至, 合而为痹也” ; 《素问·刺节论》记载: “病在骨, 骨重不可举, 骨髓酸痛, 寒气至, 名曰骨痹” ; 《素问·脉要精微 论》记载: “膝者, 筋之府, 屈伸不能, 行则偻附, 筋将惫矣” 。 此 外, 《素问· 上古天真论》还认为人的生长、 衰老与肾气的盛衰 有密切联系。 后世医家在《黄帝内经》 “肾主骨、 肝主筋” 的理 论指导下 , 经过不断的认识及临床实践, 归纳本病病机为 “肝肾 亏虚为本, 气滞、 血瘀、 痰湿凝聚为标” , 通过运用上述中药来 对症治疗骨关节炎, 创制了不少行之有效的方剂, 龟鹿二仙胶 便是在这一理论指导下创制的。

龟鹿二仙胶的性味及功用

龟鹿二仙胶最早见于《医便》 , 其原文云: “延龄育子, 龟 鹿二仙胶: 此方试治极效, 专治男妇真元虚损, 久不孕育; 并治 男子酒色过度, 销砾真阴; 妇人七情伤损血气; 诸虚百损, 五劳 七伤, 并皆治之” 。 本方由龟板胶、 鹿角胶、 人参、 枸杞组成, 具 有补益肝肾、 填精益髓、 助阳益气的作用。 方中君药龟板胶、 鹿 角胶均为血肉有情之品, 能大补阴阳精血。 龟板胶, 味甘咸, 性 寒, 归肝、 肾、 心经, 具有滋阴潜阳、 益肾健骨、 养血补心之功效, 《本草纲目》记载: “治腰脚痠痛, 补心肾” ; 鹿角胶, 味咸、 性 温, 归肝、 肾经, 具有补肾助阳、 强壮筋骨、 活血散瘀消肿的效 果, 《本草纲目》记载: “生精补髓, 养血助阳, 强筋健骨, 治一 切虚损” 。 二药合用, 一阴一阳, 互根互用, 从而达到了大补肾之 阴阳、 强壮筋骨的作用。 鹿角胶性温, 龟板胶性寒, 两者配伍, 补阳而不燥, 滋阴而不腻。 臣药人参大补元气, 与鹿角胶合用能 补气助阳; 与龟板胶合用能益气生津。 枸杞味甘、 性平, 归肝、 肾 经, 可补肝肾之阴, 四药合用, 加强了补肝肾之力。 临床研究 [1] 表 明, 龟鹿二仙胶方治疗骨关节炎效果肯定, 将本方应用于骨关节 炎的治疗, 正是针对骨关节炎患者肝肾亏虚的病机而言的。

龟鹿二仙胶不同提取部位对软骨细胞活性的影响

1. 结果分析 相关研究结果显示 [2] : 3种不同提取部位的含 药血清, 都能显著地促进豚鼠关节软骨细胞合成Ⅱ型胶原、 增 加蛋白黏多糖分泌, 上调Bcl-2基因表达, 减少MMP-3的表达, 而 其作用程度都按醇提组、 水提组、 烷提组的顺序依次递减。 该 结果表明: 龟鹿二仙胶3种提取部位都可通过增加软骨细胞外 基质Ⅱ型胶原及蛋白黏多糖的表达, 从而稳定软骨细胞表型; 通过增加Bcl-2基因表达, 从而抑制软骨细胞凋亡; 通过抑制 MMP-3表达, 延缓软骨细胞外基质的降解和破坏。 龟鹿二仙胶 通过以上途径来抑制关节软骨细胞的凋亡、 降低关节软骨组织 及细胞外基质破坏, 提高软骨细胞活性, 从而延缓骨关节炎进 程, 其中醇提组该效果最显著, 水提组次之。

2. 作用机制 龟鹿二仙胶醇提取部位主要含有甾体类生 物激素及其化合物、 皂苷以及黄酮类等物质; 其水提取部位主 要包含多糖类及氨基酸、 蛋白质、 维生素、 无机盐等化学物质; 其烷提取部位主要含有脂肪酸、 脂肪酸酯、 生物碱及部分亲脂 性的甾体类物质。 研究表明: 龟甲胶能调节机体功能, 激发机 体自身调节机制, 增强自身稳定状态 [3] ; 龟甲胶可以纠正甲亢阴 虚动物模型全身各系统的病理、 生理变化 [4-5] 。 鹿角胶可防治 骨质疏松症, 增加骨密度、 骨矿物质含量; 有保护胃黏膜, 补血 壮阳, 抗衰老, 抗疲劳, 增强机体免疫力等作用 [6-7] 。 人参皂苷 可以明显地提高骨关节炎患者关节软骨细胞中Ⅱ型胶原基因的 表达 [8] ; 人参皂苷可明显地降低成纤维细胞中基质金属蛋白酶 MMP-1和MMP-3的分泌 [9] ; 人参皂苷Rb1 [10] 、 Rg1 [11] 可分别提高大 鼠脑神经元及兔晶状体上皮细胞中Bc1-2基因的表达, 抑制有 关细胞凋亡; 还有研究显示: 枸杞多糖可降低大鼠腰椎间盘中 的MMP-3表达 [12] ; 具有增加小鼠肝细胞中Bcl-2表达的作用 [13] , 而枸杞水煎剂可明显提高大鼠的肾脏组织中Bcl-2的表达 [14] 。 以 上研究证实: 人参皂苷有干预Ⅱ型胶原、 MMP-3、 Bcl-2三者基 因表达的作用, 而枸杞多糖有干预MMP-3、 Bcl-2二者基因表达 的作用, 因此支持龟鹿二仙胶3种不同提取部位可有效干预以 上4个指标的表达, 其醇提取部位最有可能是其发挥药效的有 效部位。

龟鹿二仙胶及其拆方的相关研究

1. 龟鹿二仙胶及其拆方含药血清对关节软骨细胞增殖的 作用 李楠等 [15] 研究发现: 龟鹿二仙胶及其拆方对SD大鼠和 豚鼠软骨细胞均有促增殖作用, 其中SD大鼠软骨细胞增殖变化 率较高。 有研究 [16] 通过MTT法检测龟鹿二仙胶全方与其各拆 方对软骨细胞增殖的比较, 显示: 龟鹿二仙胶全方可显著地促 进软骨细胞增殖, 药效显著优于各拆方。 通过各拆方之间的比 较, 可以发现龟板胶或鹿角胶促进软骨细胞增殖的作用显著优 于人参或枸杞; 鹿角胶对软骨细胞的促增殖作用无明显优于龟板胶; 人参和枸杞对软骨细胞无明显促增殖作用; 证实了君药 龟板胶与鹿角胶在全方发挥促软骨细胞增殖作用中占据主导地 位, 臣药人参和佐药作为拆方, 虽然无明显促进软骨细胞增殖 的作用, 但通过与龟板胶、 鹿角胶配伍后, 可协同君药共同发 挥出更加显著的药效, 提示人参、 枸杞具有显著的协同辅助作 用, 从而初步揭示了龟鹿二仙胶的配伍规律, 为我们今后临床 遣方用药, 优化配伍提供了新思路。 此外, 临床用药也可以选择 性地增加配伍益气类(如黄芪、 党参)与滋阴中药(如熟地黄、 女贞子) , 来探究其相应药效学的变化情况。

2. 龟鹿二仙胶及其拆方含药血清对关节软骨细胞合成Ⅱ型 胶原的影响 杜江等 [17-18] 研究发现: 龟鹿二仙胶全方能显著促 进软骨细胞Ⅱ型胶原的表达, 其促增殖作用优于各拆方组。 研 究 [16] 显示: 龟鹿二仙胶促进Ⅱ型胶原合成的能力不及适宜剂量 的阳性对照组, 但全方药效显著优于各拆方。 龟板胶和鹿角胶 都能显著地促进Ⅱ型胶原合成, 鹿角胶促进Ⅱ型胶原的合成能 力无明显优于龟板胶, 人参和枸杞都无明显促进Ⅱ型胶原合成 的作用, 证实了君药龟板胶和鹿角胶在全方促Ⅱ型胶原合成药 效中发挥了主导作用, 二者药效相当; 臣药人参与佐药枸杞虽 然不能有效地促进软骨细胞Ⅱ型胶原的合成, 但可以协助君药 共同发挥出更明显的药理学效应。

3. 龟鹿二仙胶及其拆方含药血清对软骨细胞蛋白黏多糖 合成的影响 有研究 [15] 显示: 通过全方与拆方之间的对比, 发 现全方在提高蛋白黏多糖表达方面显著优于各拆方。 君药龟板 胶和鹿角胶虽然都能显著地提高蛋白黏多糖的表达, 但药效不 及全方。 各拆方之间比较, 鹿角胶与龟板胶促蛋白黏多糖合成 的药效相当, 臣药人参和佐药枸杞对蛋白黏多糖的表达无明显 促进作用。 表明君药促蛋白黏多糖合成药效在全方中占据主导 作用, 而人参和枸杞具有明显的协同辅助作用。

4. 龟鹿二仙胶及其拆方含药血清对软骨细胞凋亡的影响 4.1 Bcl-2和Bax基因表达在骨关节炎中的意义 抑凋基因 Bcl-2家族和促凋基因Bax具有同源性, 它们共有两个相同的结 构域BH1和BH2。 Bcl-2基因是从小鼠B淋巴细胞瘤中发现的, 因 其具有抑制细胞凋亡和延长细胞寿命的功能而被认为是凋亡 抑制基因。 Bcl-2通过抑制凋亡蛋白酶激活因子(APAF-1) 而抑 制凋亡的发生 [19] 。 Bcl-2在线粒体上可直接调节膜上通透性转换 孔来调节线粒体膜的通透性, 以阻止细胞色素C释放入胞质而 抑制细胞凋亡; 而Bax可直接结合到线粒体膜上, 改变膜的通透 性, 引起细胞色素C释放入胞浆, 激活Caspase家族, 最终引起 凋亡 [20-21] 。 此外, Bcl-2编码的产物 Bcl-2蛋白可通过拮抗野生型 P53蛋白的促凋亡作用, 将c-myc蛋白由促凋亡作用逆转为抑制 凋亡作用, 稳定线粒体的结构和功能, 阻断Capspase酶类活化的 上游信号传递通路等作用, 抑制多种因素诱发的细胞凋亡 [22] 。 有研究 [23] 表明, 在动物局灶性缺血和全脑缺血过程中, 此 两种基因被相应的激活和抑制, 改变了神经细胞内Bax和Bcl-2 蛋白的表达, 使Bax蛋白表达升高而Bcl-2蛋白表达降低, 两者 之间的平衡关系被破坏。 MacGibbon G等 [24] 用动物脑缺血缺氧 卒中模型发现, 在海马区、 皮质、 小脑、 纹状体的神经元细胞核 中 Bax呈高水平的表达。

软骨细胞凋亡也是受凋亡基因调控的。 Bcl-2具有抑制软 骨细胞凋亡的作用, Bax与Bcl-2的作用相反, 具有诱导软骨细 胞凋亡的作用, 因它们在结构上具有一定的同源性, 故可相互 结合形成二聚体。 当Bcl-2过度表达时, 可抑制Fas介导的细胞 凋亡, 形成Bcl-2同源二聚体; 而当Bax过度表达时, 不仅可以 与Bcl-2形成异源二聚体, 从而拮抗Bcl-2抑制凋亡的作用 [25] , 而且还可形成Bax同源二聚体, 促进细胞色素C释放 [26] 。 因此, Bcl-2与Bax的比值可以反映Bcl-2和Bax在细胞凋亡过程中的关 系: Bcl-2/Bax比值升高, 则抑制细胞凋亡, 反之, 则促进细胞 凋亡 [27] 。

4.2 龟鹿二仙胶及其拆方对软骨细胞凋亡基因表达的 影响 李楠等 [28] 发现: 龟鹿二仙胶可以非常显著的抑制SD大鼠 软骨细胞Bax、 Caspase-3、 p53的表达, 显著促进Bcl-2的表达, 从而发挥抑制凋亡作用, 但效果不如盐酸氨基葡萄糖。 卢思俭等 [29] 发现在兔实验性骨关节炎中, 软骨细胞Bcl-2、 Bax在转录和蛋白水平均增高, 但Bax增高明显, Bcl-2/Bax比值 下降, 由此认为Bax的增高是引起骨关节炎的主要原因。 细胞 染色法显示Bcl-2基因在细胞胞浆中为棕黄色片状或颗粒状阳 性染色, Bax基因在细胞核、 胞浆中为棕黄色片状或颗粒状阳 性染色, 而染色的深浅及分布面积密度可以大致判断出软骨细 胞抵抗凋亡的能力, 以及组方与拆方药效的差别。 有实验染色 结果显示龟鹿二仙胶组对Bcl-2表达的光密度值、 阳性面积数 较拆方组强, 其阳性染色亦比拆方各组深; 对Bax表达的光密 度值、 阳性面积数较拆方组弱, 其阳性染色亦比拆方各组浅。 Bcl-2表达量上升, Bax表达量下降, Bcl-2/Bax比值越大, 可表 明软骨细胞对凋亡的抵抗作用越强, 是干预药物起药效作用的 表现, 从而提示龟鹿二仙胶及其拆方含药血清能在基因水平对 硝普钠 (Sodium Nitroprusside, SNP)诱导后的软骨细胞Bcl-2与 Bax的表达具有良好调控作用, 可有效地阻断NO介导的软骨细 胞凋亡, 从而达到延缓骨关节炎发病过程的作用。

结语

龟鹿二仙胶主要提取物甾体类生物激素、 多糖类和脂肪酸 类物质能够不同程度地促进豚鼠关节软骨细胞中以上4项的表 达, 其中该方醇提取部位最有可能是发挥药效的有效部位。 在促进软骨细胞Ⅱ型胶原以及蛋白黏多糖的合成方面, 全 方药效显著优于各拆方; 鹿角胶促表达能力不优于龟板胶; 两 君药促表达药效显著优于人参和枸杞; 而人参和枸杞无明显促 软骨细胞合成Ⅱ型胶原和蛋白黏多糖的作用。

在抑制由硝普钠诱导的软骨细胞凋亡方面, 全方含药血 清药效优于拆方, 其能在基因水平对硝普钠诱导后的软骨细胞Bcl-2与Bax基因的表达具有良好的调控作用, 该作用主要体现 在凋亡早期通过上调Bcl-2以及下调Bax基因的表达量来实现, 该作用可能与其对抗经NO抑制的软骨细胞内的线粒体及柠檬 酸循环有关的酶有关, 具体作用机制仍需进一步的研究。 综上所述, 龟鹿二仙胶具有明显的软骨细胞促增殖和软骨 细胞凋亡抑制作用, 从而延缓关节软骨的退变, 这可能是其治 疗骨关节炎的机制之一。 龟甲胶和鹿角胶是龟鹿二仙胶发挥药 理学效应的主要物质。 故有研究 [30] 选用龟甲胶和鹿角胶为实验 干预药物, 发现龟甲胶和鹿角胶均可显著上调3月龄豚鼠骨关节 炎软骨细胞MEK1/2和ERK1/2的基因表达, 并可增加MEK1/2、 ERK1/2的蛋白表达, 从而对豚鼠骨关节炎软骨细胞有促增殖作 用。 由此可以看出, 研究龟甲胶和鹿角胶防治骨关节炎的作用机 制, 成为今后龟鹿二仙胶实验研究的重点, 并将为这两味君药 延缓骨关节炎发病和病理进程提供新依据。

来源:中华中医药杂志 作者:林嘉辉 陈炳艺 李楠
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